ELISA試驗(yàn)假陽性的原因及解決方案

　　一、假陽性常見原因

　　操作因素?

　　加樣誤差(如槍頭觸碰孔壁或產(chǎn)生氣泡)或洗滌不充分導(dǎo)致非特異性吸附?。

　　試劑污染或保存不當(dāng)(如TMB顯色劑避光失效)?。

　　樣本因素?

　　溶血樣本釋放過氧化物酶活性物質(zhì)，或細(xì)菌污染產(chǎn)生內(nèi)源性HRP?。

　　高濃度類風(fēng)濕因子或自身抗體干擾(如系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者)?。

　　方法學(xué)因素?

　　鉤狀效應(yīng)：樣本中待測物濃度過高導(dǎo)致信號抑制?。

　　試劑盒特異性不足(如不同廠家抗體交叉反應(yīng))?。

　　二、解決方案與優(yōu)化措施

　　操作優(yōu)化?

　　加樣規(guī)范?：懸垂加樣至孔底，避免氣泡或劃傷孔壁?。

　　洗滌：使用去離子水配制洗滌液，每次浸泡1-2分鐘，拍干力度均勻?。

　　試劑管理?：顯色劑現(xiàn)配現(xiàn)用，避免反復(fù)凍融?。

　　樣本處理?

　　溶血樣本離心去除血紅蛋白，或使用吸附劑去除干擾物質(zhì)?。

　　高濃度樣本稀釋后復(fù)測，排除鉤狀效應(yīng)?。

　　方法改進(jìn)?

　　選擇高特異性試劑盒(如阻斷法優(yōu)于競爭法)?。

　　增設(shè)陰性/空白對照，校正非特異性信號?。

　　復(fù)檢確認(rèn)?

　　初篩陽性樣本需更換方法(如化學(xué)發(fā)光法或Western Blot)驗(yàn)證?。

　　臨床樣本結(jié)合病史(如疫苗接種史、自身免疫病)綜合判斷?。

　　三、擴(kuò)展工具與流程

　　質(zhì)量控制工具?：使用Curve Expert 1.3優(yōu)化標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合?。

　　假陽性排除流程?：

　　重復(fù)實(shí)驗(yàn)確認(rèn)結(jié)果;

　　檢查試劑有效期及儲存條件;

　　樣本預(yù)處理(如離心、稀釋);

　　更換檢測方法或試劑盒復(fù)測?。

　　四、注意事項(xiàng)

　　老年人群或妊娠期女性假陽性率較高，需結(jié)合臨床評估?。

　　實(shí)驗(yàn)室需定期校準(zhǔn)設(shè)備，避免環(huán)境因素(如溫度波動(dòng))影響結(jié)果?。

　　注：僅供科研使用，以上資料供參考，如需具體產(chǎn)品說明請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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