如何判斷低吸附培養(yǎng)板是否失效?

　　顯微鏡觀察法

　　低吸附培養(yǎng)板失效時，細(xì)胞會異常貼壁或形成團(tuán)塊。鏡下觀察：

　　正常狀態(tài)?：細(xì)胞懸浮生長，呈均勻分散的球狀或聚集體?。

　　失效表現(xiàn)?：細(xì)胞貼壁生長(如呈鋪路石狀)或出現(xiàn)大量死細(xì)胞碎片?。

　　臺盼藍(lán)染色法

　　操作?：取細(xì)胞懸液與臺盼藍(lán)染液1:1混合，3分鐘內(nèi)鏡檢。

　　結(jié)果?：活細(xì)胞(膜完整)無色，死細(xì)胞(膜破損)染藍(lán)?。若活細(xì)胞率<80%，可能提示培養(yǎng)板表面吸附性異常。

　　培養(yǎng)液狀態(tài)

　　正常?：培養(yǎng)液清亮，無渾濁或沉淀?。

　　異常?：培養(yǎng)液變黃、渾濁或出現(xiàn)絮狀物，可能因細(xì)胞代謝異常或污染導(dǎo)致?。

　　細(xì)胞活性檢測

　　MTT法?：活細(xì)胞代謝還原紫色結(jié)晶，吸光度值高;失效時吸光度顯著下降。

　　熒光染色?：Calcein-AM標(biāo)記活細(xì)胞(綠色)，PI標(biāo)記死細(xì)胞(紅色)。若死細(xì)胞比例驟增，需懷疑培養(yǎng)板問題。

　　綜合判斷?：若顯微鏡下細(xì)胞貼壁、臺盼藍(lán)死細(xì)胞率>20%、培養(yǎng)液渾濁且MTT吸光度低，則培養(yǎng)板很可能失效。

　　注：供科研使用，以上資料供參考。

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